Prado er kendt for at have den mest komplette og omfattende samling af spanske malerier, især fra det 11. til det 18. århundrede. Det indeholder mesterværker af spanske mestre som Diego Velázquez, Francisco Goya, El Greco, José de Ribera og Francisco de Zurbarán. Samlingen afspejler Spaniens historie og kulturelle identitet med mange værker, der er bestilt eller indsamlet af spanske monarker.
