Prado este renumit pentru că deține cea mai completă și cuprinzătoare colecție de pictură spaniolă, în special din secolele XI-XVIII. Acesta prezintă capodopere ale unor maeștri spanioli precum Diego Velázquez, Francisco Goya, El Greco, José de Ribera și Francisco de Zurbarán. Colecția reflectă istoria și identitatea culturală a Spaniei, cu multe lucrări comandate sau colecționate de monarhii spanioli.
